SPE應用07:全自動OnlineSPE-LC/MSMS法快速測定尿樣中的堿性毒品
關鍵詞：安非他明，麻黃堿，堿性毒品，尿樣，在線固相萃取，液質聯用
時間：2016-11-22 15:01:53
全自動OnlineSPE-LC/MSMS法快速測定尿樣中的堿性毒品
1. PromoChrom Technologies Ltd. 2. 北京綠綿科技有限公司
安非他明、麻黃堿具有有多種生理活性和藥理療效，如鎮靜、鎮痛、鎮咳等，還具有一定的毒性和麻醉性，連續服用易產生習慣成癮問題。近年來，吸毒和藥物濫用對人們的生活和社會安定構成了極大威脅，成為備受關注的社會問題，因此，開發出準確、快速、簡便的檢測尿樣等體液中毒品類物質的分析方法具有重要意義。
本文將提供一種使用PromoChrom公司的SPE-04在線固相萃取儀結合液質聯用技術直接、快速檢測尿樣中的9種堿性毒品的方法。樣品經在線固相萃取凈化后直接進入液質聯用儀中分析，樣品制備和儀器分析全部自動完成。
該方法也可直接轉移至PromoChrom公司的離線固相萃取平臺（SPE-01、SPE-03），萃取完成后，手動轉移樣品至液質聯用儀進行分析。
1、儀器
高效液相色譜儀： Agilent 1260 Infinity LC。
質譜檢測器：Agilent 6460A MSD。
在線固相萃取儀：SPE-04 Online SPE（帶衍生功能），PromoChrom Technologies。
2、方法適用的目標物
目標分析物為amphetamine（安非他明）, metamphetamine（甲基苯丙胺），MDA（4,5－亞甲基二氧基苯丙胺），MDMA（3,4－亞甲基二氧甲基苯丙胺），MDEA（甲基二乙醇胺）, phentermine（芬特明），phenylpropanolamine（去甲麻黃堿），ephedrine（麻黃堿）和pseudoephedrine（偽麻黃堿）。
3、分析方法
取1mL尿液樣品于樣品瓶中（準確移取），直接用于固相萃取。
3.1 在線固相萃取條件
固相萃取柱： Bond Elut Plexa PCX，30 mg/3 mL，PromoChrom Technologies；（將方法略為調整后，也可以使用其它強陽離子交換柱）。
淋洗溶劑：溶劑1為甲醇；溶劑2為2%甲酸的內標溶液（含MDA-D5, MDMA-D5, MDEA-D6, amphetamine-D6, metaamphetamine-D9 各為500 ng/mL. 使用當天配制）；溶劑3 為水；溶劑4為甲醇+氨水（90：10），氨水濃度為28-30%，使用當天配制）；衍生試劑1為2%甲酸水溶液。
SPE-04在線固相萃取方法設置：
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行號
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操作
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體積
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流速
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注釋
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0
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Elute C1 with 1
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2.5
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5
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用甲醇預淋洗2.5毫升, 流速5毫升/分。
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1
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Rinse vial with 2
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1.7
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5
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將1.7毫升內標溶液混入樣品，然后加回到SPE柱。同時甲酸使分析物帶正電荷，便于被陽離子交換柱吸附。
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2
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Rinse vial with 1
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1.5
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5
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用甲醇清洗樣品瓶，洗液加入SPE柱。
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3
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Elute C1 with 4
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0.2
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5
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將淋洗溶劑切換到溶劑4。
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4
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Collect
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1.0
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5
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繼續用溶劑4淋洗，收集1.0毫升組分。溶劑4里的氨水使堿性化合物的正電荷消除，便于洗脫。
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5
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Load fraction to heater
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0.4
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0
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將0.6毫升組分和0.4毫升衍生試劑1（2%甲酸溶液）混合后導入衍生室。混合后可以中和組分的堿性并使組分溶液的組成和LC的起始流動相更接近，使HPLC分析的峰形和分離更好。
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6
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Inject reactant
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0.5
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5
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將組分引入進樣閥的樣品環。環體積為20微升。
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7
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Start LC
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1
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0
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觸發LC-MS開始分析樣品。
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3.2 液質聯用條件：
色譜柱：Poroshell 120 EC-C18， 3X50mm，2.7um，Agilent；
流動相：A為含0.1%甲酸的甲醇，B為0.1%甲酸水溶液；
流速：0.8 mL/min；
梯度淋洗的條件如下表：
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Time（min）
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0.0
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1.5
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3.5
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3.6
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6.6
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6.7
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B%
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15
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15
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30
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90
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90
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15
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分析停止時間為7分，平衡時間為2分鐘。
3.3 離線固相萃取方法
離線固相萃取儀：SPE-01或 SPE-04或 SPE-03，PromoChrom Technologies；
固相萃取柱： Bond Elut Plexa PCX，30 mg/3 mL，PromoChrom Technologies；（將方法略為調整后，也可以使用其它強陽離子交換柱）。
淋洗溶劑：溶劑1為甲醇，溶劑2為2%甲酸的內標溶液（含MDA-D5, MDMA-D5, MDEA-D6, amphetamine-D6, metaamphetamine-D9 各為500 ng/mL. 使用當天配制），溶劑3 為水，溶劑4為乙酸乙酯+乙醇+氨水（50：50：15，氨水濃度為28-30%，使用當天配制）。
樣品：樣品瓶中的尿樣體積為0.7毫升（準確移取）。
離線固相萃取儀器方法設置：
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行號
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操作
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體積
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流速
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注釋
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0
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Elute 1
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5
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2.5
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用甲醇預淋洗2.5毫升, 流速5毫升/分。
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1
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Rinse 2
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5
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1.7
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將1.7毫升內標溶液混入樣品，然后加回到SPE柱。在這一步，甲酸使堿性化合物帶正電荷，便于被陽離子交換柱吸附。
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2
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Rinse 1
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5
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1.5
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用甲醇清洗樣品瓶，洗液加入SPE柱。
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3
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Elute 4
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5
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0.2
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將淋洗溶劑切換到溶劑4。
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4
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Collect1
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5
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1.5
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繼續用溶劑4淋洗，收集1.5毫升組分。溶劑4里的氨水使堿性化合物的正電荷消除，便于洗脫。
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收集的組分在45度下用氮吹儀濃縮近干。用1.0 mL HPLC的起始流動相定容。在本方法中，起始流動相為甲醇+水+甲酸（15：85：0.1）。溶劑4 中的乙醇在濃縮過程中可以把組分里的水帶走，不會照成濃縮后有水滴殘存。
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