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快速提取南芥或水稻穗RNA

關鍵詞:南芥、水稻穗、RNA、提取、鋼珠、格瑞德曼、綠綿科技、研磨
時間:2017-07-24 16:54:49

GT100南芥或水稻穗RNA快速提取步驟
來源:北京格瑞德曼儀器設備有限公司

種方法-濕磨法
1.取打碎機適配器于-80°C冷凍約15min。
2.取一指節長度的花序,好帶上一片葉子,(材料量可多可少,7d大小的苗上部分也能提出RNA),放入國產2ml EP管中,加一粒鋼珠,液氮速凍。之后用鑷子取出,快速加入適配器中。(好用國產的EP管即可,進口的管子液氮凍過后,容易裂)
3.打碎15s,50HZ。(水稻嫩葉為45S,60HZ;老葉為,70S 60HZ)
4.將材料再次放入液氮中。
5.用磁鐵吸出鋼珠,加入1ml Trizol,余下步驟即正常的RNA提取步驟。
第二種方法-干磨法
1.取一指節長度的花序(材料量可多可少,7d大小的苗上部分也能提出RNA),放入國產2ml EP管中,加一粒鋼珠,400ul Trizol。(TRIZOL是一種新型總RNA抽提試劑,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質,能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。)
2.打碎1min 50HZ (水稻嫩葉為45S,60HZ ;老葉為,70S 60HZ)。
3.吸出鋼珠,補600ul Trizol。
4.余下步驟即正常的RNA提取步驟。
注意:鋼珠遇到Trizol 會被溶解一部分,所以之后的提取液是黃色的(有鐵離子)。 


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