CEInfinite質譜直聯型全柱成像等電聚焦iCIEF
CEInfinite iCIEF-MS Online coulping platform
在蛋白質生物制品的開發和生產中，由于翻譯后修飾(PTMs)和降解，會產生目標蛋白質的電荷異構體。生物制藥公司依靠毛細管等電聚焦(CIEF)和成像CIEF (iCIEF)來量化電荷異構體。表征生物電荷異構體對于許多生命周期階段都是有用的，包括細胞系選擇、穩定性研究、配方和過程控制，但是這種表征需要將蛋白質分離成具有足夠純度的單個電荷異構體的餾分以用于下游分析。
此外，iCIEF與用于表征的質譜儀(MS)的直接耦合將顯著簡化表征過程。
AES開發了CEInfinite制備型iCIEF系統和專有的全柱成像檢測(WCID)分離柱，用于iCIEF-WCID的分離和與MS在線耦合，允許實時觀察分離聚焦(iCIEF)動態以及隨后分離電荷異構體峰的遷移過程。在壓力遷移過程中，電場使分離毛細管中的樣品保持聚焦。分離毛細管的內徑較大，而傳輸毛細管的內徑較小。因此，這種內徑的差異極大地減少了分離的蛋白質異構體在離開小柱時的擴散與再混合。
詳情介紹
CEInfinite iCIEF-MS的亮點
直接將iCIEF-MS與Thermo Fisher Scientific、Waters和Bruker的傳統低流量或高靈敏度納流ESI聯用。
任何緩沖液或溶液都可以用作補充液。不涉及化學遷移。蛋白質電荷變異體在根據pI不同依次被引入MS。
CE-MS可以直接從任何現有的iCIEF或CIEF方法轉換而來。在低和高樣品濃度下都能獲得良好的分離度。
NIST mAb 樣品的iCIEF-MS分析
iCIEF-UV(紅色)和iCIEF-MS(藍色)可清晰觀察到電荷異構體的Profile，并且獲得了所有變異體峰的優異MS譜圖，這允許我們對大多數完整的NIST mAb電荷變體進行解卷積。
結果表明，堿性峰B1和B2主要是C端賴氨酸的異構化造成的，酸性峰A1分子量與主峰差異較小，可能是由于脫酰胺等修飾造成的，需要通過制備型iCIEF做進一步的研究和確認。
來自客戶的評價：
“iCIEF在生物制藥開發過程中監控電荷變化方面發揮著至關重要的作用。CEInfinite允許我們獲得iCIEF檢測到的產物變體的質量讀數，這對于理解電荷變異體的化學性質有很大的幫助。當將CEInfinite與Orbitrap MS系統提供的高分辨率精確質譜結合使用時，可以獲得對產品變異體和產品穩定性的詳細了解。
簡而言之，使用CEInfinite的iCIEF-MS是生物制藥開發中非常強大的表征工具。"
-Dan Bach Kristensen博士
Symphogen首席科學家
